供稿：医院王荣
AIH是一种由针对肝细胞的自身免疫反应所介导的界面性炎症反应，以血清自身抗体阳性、高LgG和（或）γ-球蛋白血症为特点，如不治疗常可导致肝硬化、肝功能衰竭。AIH根据自身抗体的不同分为两类：抗核抗体（ANA）和抗平滑肌抗体（ASMA），或抗可溶性肝抗原/肝胰抗原抗体（抗SLA/LP）阳性者为1型AIH；抗肝肾微粒体抗体1型（LKM-1）和抗肝细胞溶质抗原-1型（抗LC-1）阳性者为2型AIH1-3。抗LKM-1抗体的检测是自身免疫性肝炎（AIH）诊断的常规检测项目，且女性较男性多发，据统计，西欧AIH的发病率为每年0.‰4,5。约1％成人AIH患者中可出现抗LKM-1抗体，临床上出现不明原因的转氨酶升高、疑似自身免疫性肝炎的患者可做抗LKM-1抗体的检测。目前临床上对抗LKM-1抗体的检测主要有间接免疫荧光法（IIF）、酶联免疫吸附法（ELISA）、线性免疫印迹法（LIA）等方法，本文探讨一例抗LKM抗体相关自身免疫性疾病的病例分析，从实验室检测角度剖析该类标本检测时的重点及难点。
检测方法
试剂盒均购自欧蒙（北京）医学实验诊断有限公司，各种试剂盒的使用均严格按照使用说明操作。间接免疫荧光法（IIF）：在肝细胞胞浆产生平滑的荧光，而大鼠肾（尤其在肾皮质）仅近端肾小管产生细颗粒荧光，远端肾小管未出现特异性荧光，通常肝细胞的荧光强度高于近端肾小管。酶联免疫吸附法（ELISA）：以20RU/mL为临界值，若大于临界值，则判为阳性，否则判为阴性。线性免疫印迹法（LIA）：采用配套软件EUROLineScan进行显色结果灰度值扫描分析，灰度值≤5为LIA阴性（-）；6~10为LIA临界（±）；≥11为LIA阳性（＋）。
患者基本情况
女，43岁，抗核抗体（ANA）检测结果为1:均质型/核点型，病毒性肝炎结果为阴性，自身免疫性肝病抗体谱检测结果显示M2、LC-1、BPO、PML、SP为阳性。该患者临床诊断：1.血管免疫母细胞性T细胞淋巴瘤2.血小板减少3.慢性肾炎综合征4.自身免疫性肝炎5.甲状腺功能减退。
三种方法检测LKM抗体结果
ELISA方法检测该患者LKM-1抗体结果阳性；线性免疫印迹法测定该患者样本，其抗LKM-1抗体为弱阳性。将LKM-1阳性对照及该患者的间接免疫荧光结果进行分析（见图1）。LKM-1阳性对照HEP-2细胞上可见低滴度的颗粒状荧光，大鼠肾组织可见近端肾小管上皮组织细胞胞浆荧光染色，而远端小管上皮组织细胞胞浆阴性而呈现出典型的“半阴半阳”荧光，猴肝组织可见肝细胞胞浆呈现均匀荧光染色（图1，上）；而该患者的HEP-2细胞上可见滴度较高的典型均质型及核点型荧光，大鼠肾组织所有肾小管具有明显的颗粒状有荧光，甚至连肾小球都有稍弱的荧光，表现为线粒体阳性的特点；该患者样本可能由于受到线粒体荧光、均质型及核点型荧光的干扰较难判断LKM核型，而放在高倍镜视野下仔细观察可见大鼠肾（尤其在肾皮质）近端肾小管有细颗粒荧光，远端肾小管特异性荧光显著低于近端肾小管荧光，综合判断该患者LKM间接免疫荧光法结果为弱阳性。
讨论
1
抗LKM-1抗体阳性患者在临床上十分罕见，韩莹等研究团队收集了-年10年的标本发现例标本中只有15例标本抗LKM-1抗体为阳性，阳性率为0.‰6，可见抗LKM-1抗体在一般人群中的阳性率极低7,8。但抗LKM-1抗体作为2型AIH标志性抗体在AIH的临床诊断中必不可少。目前临床上对抗LKM-1抗体的检测主要有间接免疫荧光法（IIF）、酶联免疫吸附法（ELISA）、线性免疫印迹法（LIA）等方法，目前实验室检测LKM的方法酶联免疫吸附法的敏感性较高，但是特异性较差，容易受血清物质的干扰，适用有症状人群的筛查。间接免疫荧光法特异性较高，但是主观性较强，需要经验丰富的技术人员识别，否则容易漏诊造成假阴性；而且本研究表明当标本出现线粒体阳性时，就目前临床实验室技术而言很难排除干扰，就使得LKM阴阳性的判断变得十分困难，从而造成漏诊或误诊。线性免疫印迹法特异度较高，但是在敏感性上受到一定限制。临床实验室应联合多种检测方法提高LKM抗体的检出率，辅助临床做出正确诊断。
2
本研究中患者为43岁的中年女性，与研究报道2型自身免疫性肝炎好发于青少年女性有所不同6,9，这可能与本文研究只有一例患者有关。AIH中LKM-1的阳性率只有3-4%，客观上使得临床实验室收集抗LKM-1抗体阳性的大样本十分困难。另外从本研究结果上看，抗LKM-1抗体经常会伴随抗肝细胞溶质抗原Ⅰ型（LC-1）抗体的出现。而抗LC-1抗体为2型AIH的另外一个特异性抗体10，其阳性率大于30%，在2型AIH血清中可与LKM-1同时存在，也可单独作为诊断指标存在11,12，所以临床实验室进行多个指标的联合检测有助于提高对AIH的诊断13。此外，在本研究中，该患者除了LKM-1、LC-1这两个2型AIH较特异的指标阳性外，M2，BPO，PML，SP这几个PBC相关性较高的指标均为阳性，提示多种自身免疫性肝病常常在同一患者中并行出现。
综上所述
本研究中该病例的结果显示：针对LKM抗体这种阳性率极低但对于AIH的临床诊断又十分重要的抗体，实验室应该联合多种检测方法提高检出率和准确率。
参考文献
1.自身免疫性肝炎诊断和治疗共识()[J].中华肝脏病杂志.;24(01):23-35.
2.ChristenU,HintermannE.AutoantibodiesinAutoimmuneHepatitis:CanEpitopesTellUsabouttheEtiologyoftheDisease?FrontImmunol.;9:.
3.KomurasakiR,ImaokaS,TadaN,OkadaK,NishiguchiS,FunaeY.LKM-1serafromautoimmunehepatitispatientsthatrecognizeERp57,carboxylesterase1andCYP2D6.DrugMetabPharmacokinet.;25(1):84-92.
4.LiberalR,Mieli-VerganiG,VerganiD.Clinicalsignificanceofautoantibodiesinautoimmunehepatitis.JAutoimmun.;46:17-24.
5.LiberalR,GrantCR,LonghiMS,Mieli-VerganiG,VerganiD.Diagnosticcriteriaofautoimmunehepatitis.AutoimmunRev.;13(4-5):-.
6.韩莹闫,廖慧钰,孙丽梅,黄云丽,黄春洋,张海萍,张小丹,边新渠,任美欣,杜晓菲,刘燕敏.抗肝肾微粒体抗体在肝病患者中的临床意义评价.中华肝脏病杂志.;25(11):-.
7.LonghiMS,Mieli-VerganiG,VerganiD.Autoimmunehepatitis.CurrPediatrRev.;10(4):-.
8.InvernizziP,AlessioMG,SmykDS,etal.Autoimmunehepatitistype2associatedwithanunexpectedandtransientpresenceofprimarybiliarycirrhosis-specificantimitochondrialantibodies:acasestudyandreviewoftheliterature.BMCGastroenterol.;12:92.
9.SaadahOI,BokharyRY.Anti-mitochondrialantibodypositiveautoimmunehepatitistriggeredbyEBVinfectioninayounggirl.ArabJGastroenterol.;14(3):-.
10.LenziM,ManottiP,MuratoriL,etal.Livercytosolic1antigen-antibodysystemintype2autoimmunehepatitisandhepatitisCvirusinfection.Gut.;36(5):-.
11.张海萍马,李丽娟,赵丹彤,陈欣欣,娄金丽,闫惠平.77例抗可溶性肝抗原抗体阳性肝病患者的自身抗体特征分析.中华检验医学杂志.2(11):-----.
12.李文忠罗,潘章颖,袁远英.联合检测血清ANA、SMA、PANCA、LKM、SLA在自身免疫性肝炎中的应用.中国现代医生.2;57(16):-.
13.孙喜明田,马娟,赵瑾,高振奎,李佳.自身免疫性肝病抗体谱检测在自身免疫性肝病诊断中的价值.中国临床医生杂志.;48(01):94-97.
审稿：江涛
编辑：薛娟
预览时标签不可点收录于话题#个上一篇下一篇
转载请注明：http://www.lygangv.com/ysbj/13836.html
当前位置： 甲型病毒性肝炎 > 饮食保健 > 一例抗肝肾微粒体抗体相关自身免疫性疾病的
