N端PreS1序列调控细胞培养产生的乙型

摘要

高效的乙型肝炎病毒（hepatitisBvirus,HBV）细胞培养系统对于研究病毒特性和抗病毒药物研发至关重要。目前，用于细胞培养中HBV感染能力检测的病毒颗粒主要来源于整合了HBV基因组的HepG2.2.15或HepAD38细胞系。但这并不适用于评估与病毒多态性有关的病毒特征或针对抗病毒治疗产生的耐药突变。另外，通过复制性克隆质粒DNA瞬时转染培养细胞获得的HBV感染效率有限。本研究发现HBV的preS1区域的11个氨基酸缺失（d11突变）可以增强培养细胞产生的HBV（cellculture-generatedHBV，本文简称HBVcc）对表达牛磺胆酸钠共转运多肽的HepG2（HepG2/NTCP）细胞的感染性。结果显示，转染HBVC基因型d11突变（GTC-d11）产生的HBVcc对HepG2/NTCP细胞的感染效率大约比野生型（GTC-wt）高10倍，并且以相同GEq（genomeequivalents，基因组等价物）水平分别加入GTC-d11转染和HepG2.2.15产生的病毒后，感染的细胞数量相当。GTC-d11病毒感染后，可以检测到前基因组RNA（pgRNA）随时间而增加及共价闭合环状DNA（cccDNA）的有效合成。作者使用丁型肝炎病毒（HDV）感染系统证实d11突变增强了L-HBs蛋白的感染性，GTC-d11病毒在细胞表面的附着能力增强是造成这种高效感染的原因。在未来的研究中，GTC-d11病毒系统有望用于研究HBV在培养细胞中的感染和传播，以及制定新型抗病毒策略。

HBVcc感染HepG2/NTCP细胞

为了比较感染效率，作者构建了C基因型（genotypeC，GTC）和D基因型（genotypeD，GTD）的1.38倍基因组长度的HBV克隆，并通过瞬时转染HepG2细胞产生HBVcc。将产生的病毒以每个细胞GEq接种于HepG2/NTCP-C4细胞，并与HepG2.2.15来源的HBV（基因型D）的感染效率进行比较。接种GTC-wt后12天可观察到HBc阳性细胞，但是其感染效率远低于来自HepG2.2.15细胞系的病毒（图1）。作者注意到，接种GTD-wt病毒后出现的HBc阳性细胞比接种GTC-wt病毒的更多，并据此推断HBVGTD病毒的感染效率高于GTC。进而通过分析比对肝炎病毒数据库（

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