兽医全攻略之猪细小病毒感染Porcin


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猪细小病毒可引起猪的繁殖障碍性疾病,其特征为感染母猪,特别是初产母猪产出死胎、畸形胎、木乃伊胎、流产及病弱仔猪,而母猪本身无明显症状。本病于年在英国报道,其后欧、美、亚洲及大洋洲很多国家均有报道。我国于年首次分离到病毒,此后上海、黑龙江、吉林、四川、浙江等地均证实存在该病。目前,该病也是危害我国养猪业的重要疫病之一。

病原

猪细小病毒(Porcineparvovirus,PPV)属于细小病毒科细小病毒属成员。病毒粒子呈圆形或六角形,无囊膜,直径20?23纳米,20面体对称。病毒在猪原代细胞如猪肾、猪睾丸细胞及传代细胞如PK-15、ST、IBRS2等细胞上都能生长繁殖,并出现细胞病变。病毒粒子以完整病毒粒子和空衣壳粒子两种形式存在。用免疫突光技术可査出胞浆中的病毒抗原,病毒在细胞中可产生核内包涵体。病毒能凝集人、猴、豚鼠、小鼠及鸡的红细胞。

本病毒基因组为单股DNA,编码VP1和VP2结构蛋白以及NS1、NS2、NS3非结构蛋白,其中,结构蛋白基因变异较大,但可诱导机体产生中和抗体。有报道可用NS1蛋白来区别灭活疫苗感染猪和自然感染猪。

PPV只有一个血清型,但不同分离毒株毒力不同。按病毒致病性与组织嗜性大致可分为4个型。第1型是以NADL-2株为代表的细胞适应性弱毒株,怀孕母猪感染后不能经胎盘感染胎儿。NADL-2毒株感染细胞中存在干扰缺损颗粒,可干扰或减缓NADL-2的复制。第2型是以NADL-28株为代表的强毒株,血清阴性怀孕母猪感染后将导致病毒血症,并通过胎盘垂直感染使胎儿死亡。第3型是以Kressc株为代表的皮炎型强毒株,但仍能使妊娠后期的胎儿死亡。第4型为肠炎型毒株,主要引起肠道病变。

本病毒耐热性强,56°C48小时、72°C2小时和80°C5分钟就失去感染力和血凝活性。病毒对乙醚、氯仿不敏感。病毒pH适应范围很广,pH3.0?9.0,90分钟仍稳定;pH2.0,90分钟才可将其灭活。0.5%漂白粉液、2%NaOH5分钟可杀死病毒;而2%戊二醒则需要20分钟,3%甲醛需1小时,甲醛蒸气和紫外线需要相当长时间才能杀死本病毒。

流行病学

猪是已知的唯一易感动物,不同年龄、性别的家猪和野猪都可感染。

病猪和带毒猪是主要传染源。病毒可通过胎盘传给胎儿,感染本病毒的母猪所产死胎、活胎、仔猪及子宫分泌物中均含有高滴度的病毒。荧光抗体检査证明病毒主要分布于猪体内一些增生迅速的组织,如淋巴生发中心、结肠固有层、肾间质、鼻甲骨膜等。子宫内感染的仔猪至少可带毒9周,有些具有免疫耐性的仔猪可能终生带毒和排毒。公猪在传播PPV方面起着重要作用。在急性感染时,被感染公猪的精细胞、精索、附睾和副性腺都可分离出病毒,在其配种时易传给易感母猪。本病除可经胎盘感染和交配、人工授精感染外,母猪、育肥猪和公猪主要是通过被污染的食物、环境经呼吸道和消化道感染。污染的猪舍在病猪移出后空圈4个半月,经常规方法清扫后,当再引进易感猪时,仍有可能被感染。此外,PPV能在牛、绵羊、豚鼠、猫、小鼠及大鼠体内增殖,其血清中含有抗PPV的特异性抗体。老鼠可能也是本病毒间接传播的媒介。

本病常见于初产母猪,一般呈地方流行性或散发。在新建猪场和初次感染的猪场常呈流行性,一旦引入,可引起暴发流行,使多数妊娠母猪繁殖障碍。在本病发生后,猪场可能连续几年不断地出现母猪繁殖失败。母猪怀孕早期感染时,其胚胎、胎猪死亡率可高达80%?%。

猪感染本病毒1?6天后可产生病毒血症,1?2周后随粪便排出病毒,污染环境。7?9天后可测出血凝抑制抗体,21天内抗体效价可达1:,且能持续数年。

主要症状和病理变化

PPV可引起繁殖障碍,主要表现为胎儿和胚胎的感染和死亡,而仔猪和母猪的急性感染通常都表现为亚临床病例。母猪不同孕期感染,可分别造成死胎、木乃伊胎、流产等不同症状。怀孕早期感染时,可引起胎儿死亡而减少产仔总数。在怀孕30?50天之间感染时,主要是产木乃伊胎,一般不发生流产。怀孕50?70天感染时,多出现严重的胎盘炎而致死产或流产。母猪在怀孕中后期受感染后也可发生经胎盘的感染,但此时胎儿常能在子宫内存活而无明显临床症状。在怀孕期70天后,多能正常生产,但母猪子宫内膜有轻度炎症,胎盘有部分耗化。大多数胎儿能对病毒感染产生有意义的免疫应答而存活,但这些仔猪常带有抗体和病毒。

此外,本病还可引起产仔瘦小、弱仔,母猪发情不正常,久配不孕等症状。对公猪的受精率或性欲没有明显影响。

眼观病理变化为母猪子宫内膜有轻微炎症,胎盘有部分钙化,胎儿在子宫有被溶解、吸收的现象。感染的胎儿表现不同程度的发育障碍和生长不良,可见充血、水肿、出血、体腔积液、脱水(木乃伊化)及坏死等病变。

组织学病变为母猪的妊娠黄体萎缩,子宫上皮组织和固有层有局灶性或弥散性单核细胞浸润。感染死亡胎儿镜检病变主要是多数组织和血管广泛的细胞坏死、炎症和核内包涵体等。特征性病变是脑膜脑炎,表现大脑灰质、白质和软脑膜有以增生的外膜细胞、组织细胞和浆细胞形成的血管套现象。

诊断要点

1.一般诊断如果第1?2胎母猪发生流产v死胎、胎儿发育异常等情况而母猪没有明显的临床症状,同时有其他证据可认为是一种传染病时,应考虑到本病的可能性。

2.病原学诊断血凝试验、免疫突光抗体技术、PCR技术、病毒分离和鉴定,其中,抗体染色法比较可靠、:敏感。诊断时,可采集木乃伊化胎儿或病死胎儿的肺脏做适当处理后,进行病毒检测。

病毒分离与鉴定:一般选用怀孕70天以内母猪的流产胎儿、死胎和木乃伊胎儿的内脏作为病毒分离材料,.最后再用荧光抗体技术来检验细胞培养物中是否分离到病毒。

PCR技术:该技术具有简便、快速、特异和高灵敏度等特点,引物可大量合成,长期保存,还可避免散毒。目前,虽然在临床应用上还存在一定困难,但具有很好的应用前景。

3.血清学诊断血清中和试验、血凝和血凝抑制试验(HA和HI)、乳胶凝集试验、荧光抗体技术、酶联免疫吸附试验、琼脂扩散试验和免疫胶体金技术等,可用于本病毒抗体检测,作为辅助诊断。

血凝抑制试验:该方法最为常用。病料可采取母猪血清,也可用70日龄以上感染胎儿的心血或组织浸出液。被检血清先经56°C30分钟灭活,加入50%豚鼠红细胞(最终浓度)和等量高岭土,摇匀后室温放置15分钟,经转/分,离心10分钟取上清液,以除掉血清中的非特异性凝集素和抑制因素。抗原用4个血凝单位的标准血凝素,红细胞用0.5%豚鼠红细胞悬液。判定标准暂定1:。

免疫荧光抗体技术:该方法可直接镜检胎儿组织冰冻切片,也可以快速准确地检测出病毒抗原,也可以在病毒培养过程中,检查接种病毒的单层细胞,较HI敏感,但检测组织病料中的PPV抗原时,因病毒粒子小,检出率较低。而间接免疫荧光诊断技术检出率比较高,5小时内即可报告检验结果。

免疫胶体金技术:是以胶体金为标记物的一种新的免疫学测定方法,可用PPV抗体检测,简便、快速,但灵敏度相对较低。

乳胶凝集试验:是用聚苯乙烯乳胶颗粒致敏PPV抗原来检测血清。本方法与HI相比,具有简便、快速、经济等优点,尤其适合于临床上的现场检测,但只能用于抗体的定性检测,不能进行血清抗体滴度的监测。

防治措施

1.预防性措施主要采取以免疫预防为主的综合性防治措施。目前,该病疫苗有活疫苗和灭活疫苗,已经在世界范围内应用,并取得了较好效果。一般对第1?2胎母猪配种前1?2个月左右进行免疫接种,能有效预防母猪感染细小病毒。活疫苗产生的抗体水平高,维持时间可达1年以上。灭活苗免疫期可达4个月以上。

注意加强动物卫生管理以及灭鼠工作,控制带毒猪传入猪场。在引进猪时应加强检疫,当HI抗体滴度在1:以下或阴性时,方可准许引进。引进猪只应隔离饲养2周后,再进行一次HI抗体测定,证实是阴性者,方可与本场猪混群饲养。此外,在断奶时将仔猪从污染猪群移到没有本病污染的地区饲养,可以培育出血清阴性猪群。

2.紧急预防与治疗目前本病尚无有效的药物治疗方法,一旦发病,应将发病母猪、仔猪隔离或淘汰。搞好猪舍卫生,所有猪场钚境、用具应严密消毒,控制疫情发展。

诊疗注意事项

(1)临床上可引起母猪繁殖障碍的疾病很多,包括饲养条件突然变化、饲料霉变和多种传染性疾病,临床上必须注意仔细分析,特别应注意与猪伪狂犬病、猪乙型脑炎和猪布鲁氏菌病等鉴别诊断。

随着养殖集约化的不断发展,PPV常与引起,猪繁殖障碍的其他病毒出现混合感染,包括猪伪狂犬病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪瘟病毒和猪圆环病毒2型(PCV2)等。最近研究表明,PPV与断奶仔猪多系统衰竭综合征(PM-WS)和猪渗出性皮炎的发生有一定关系。用PCV2、PPV共同感染猪群,能复制出PMWS的典型特征。

(2)正确选择和采集病料是保证实验室诊断正确无误的关键因素之一,一般选择新鲜的木乃伊化胎儿、病死胎儿肺脏,但怀疑70日龄以上母猪的木乃伊化胎儿、死产仔猪和初生仔猪则不茸送检,因此时它们的组织内已存在病毒抗体,会干扰病毒的分离鉴定,影响检测结果。抗体检测通常采集血清,但如果采集不到血清时,将胎儿或胎儿内脏置于塑料袋内,4C条件下过夜,收集体液也可做抗体检测。

(3)HA和HI试验最为经典,检测PPV抗体操作简便,不需要特殊设备,但该方法需采鸡血或豚鼠血,被检样品预处理比较繁杂,并只能证明有PPV感染,不能证明是否新近感染。虽能进行快速、大量的诊断,但灵敏度低、特异性不强,所以只能作为辅助诊断方法。确诊需要通过检査双份血清,或直接进行病毒检测。

PCR方法快速、敏感,可用于病毒检测,但是由于PPV的广泛存在以及猪体感染病毒后长期带毒的现象,很难通过PCR检测区别自然感染和疫苗株。

(4)近年来已公认使用疫苗是预防PPV感染、提高母猪繁殖率的最有效的方法,合理选择适合本猪场的PPV疫苗,可以减少该病带来的经济损失。但必须注意,母猪配种前数周接种PPV疫苗,可以产生较强免疫力,其仔猪的母源抗体也可持续14?24周,而母源抗体会干扰活疫苗主动免疫,HI抗体效阶1:80时可抵抗PPV感染。所以,使用活疫苗时,后备母猪的免疫接种时间范围比较小。一般应选择7月龄左右时首次免疫,配种后可以加强免疫一次。但母源抗体对灭活疫苗影响不大。对于曾发生过本病的猪场,有些猪感染后获得免疫,即体内已产生抗体,其滴度高,而且持续时间长,可以获得良好的保护。

(姜平)

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